草莓‘托特母’(Totem)是加拿大主栽品種之一，是典型的喜冷涼草莓品種。該品種植株長勢強，株型直立，果實深紅色、粗圓錐形、甜酸適可、可溶性固形物7.5%以上，適宜深加工。

　　云南省農科院高山經濟植物研究所于2005 年8 月從山東省青島農科院引入草莓‘托特母’材料1000 株作為母本苗進行組培擴繁，一方面生產脫毒種苗，另一方面提高種苗的繁殖系數，適應廣大種植戶和市場對優質種苗的需求。草莓常規的育苗方式有分株繁殖和組培擴繁，分株繁殖雖然有簡便易行，成本低廉等優點，但是分株繁殖一般采用母株發生的匍匐莖來獲得種苗，由于采果后的母本長勢很弱，匍匐莖的量少，植株細弱，多種病菌的交叉感染危害嚴重。造成品種的優良種性退化、產量降低、品質下降。以海拔2400 m左右的麗江為代表的滇西北地區，地處青藏高原南麓、橫斷山脈中段，是青藏高原與云貴高原相連接的過渡帶，位于北緯25°59′至27°56′，東經99°23′至105°31′之間，具有典型的低緯高原氣候特征。滇西北由于海拔較高，紫外線強，是生產有機草莓的理想區域，非常適宜冷涼型草莓品種‘托特母’生長，其果實著色濃烈鮮艷，果肉里外透紅，果子風味香甜。此外由于年溫差小，日溫差大，有利于有效營養成份的積累，所產草莓果大、質優。

　　1 材料與方法

　　1.1 試驗材料

　　草莓‘托特母’采自高山經濟植物研究所試驗基地，取帶莖尖的匍匐莖為接種材料外植體。

　　1.2 試驗方法

　　1.2.1 外植體的摘取及處理 選9-10 月天氣晴好時，剪取生長健壯且無病蟲害的植株匍匐莖莖尖2 cm，小心剝離莖尖外面的苞葉，切取0.8 mm左右的莖尖，自來水沖洗1 h，無菌條件下75%酒精消毒30 s，無菌水洗3 遍，然后以0.1%升汞溶液進行表面消毒(設6、8、10、12、14 min 5 個處理，以獲得最佳消毒時間)，無菌水反復浸洗5 次，無菌濾紙吸干水分，各取40 個莖尖接種于芽誘導培養基，20 d 后統計試驗結果。

　　1.2.2 芽的誘導分化培養 各取處理好的莖尖20個分別接種于3 種誘導培養基中：MS +6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L，MS +6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L，MS +KT 0.5 mg/L+2-4D 0.1 mg/L。均附加30 g/L蔗糖及7 g/L瓊脂，pH調至5.8。15 d 后統計試驗結果。

　　1.2.3 繼代增殖培養 將初代誘導培養的芽分別接種到8 種增殖培養基上：MS +6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L，MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L，MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L，MS+6-BA2.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L，MS+KT 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L，MS +KT 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L，MS +KT 1.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L，MS+KT2.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L。均附加蔗糖30 g/L及瓊脂7 g/L，pH調至5.8。30 d 后統計試驗結果。

　　1.2.4 生根培養 生根培養基分別為1/2MS +IBA 1.0 mg/L+AC5 g/L，附加20 g/L蔗糖及5.5 g/L瓊脂。pH調至5.8。

　　1.2.5 培養條件 以上培養期間溫度為25 ℃，光照強度為1500 lx，光照時間為12 h/d 。

　　2 結果與分析

　　2.1 不同時間的升汞處理對草莓‘托特母’匍匐莖莖尖的影響

　　升汞消毒時間的長短對接種外植體污染率的影響非常明顯，由表1 可以看出，0.1%升汞處理的時間越長污染率越低，但是時間過長(14 min)，外植體容易褐化死亡，所以選擇最佳的滅菌時間在初代培養中至關重要。本試驗結果表明0.1%升汞處理少于10 min，污染率較高，污染表現較早，2 d 左右開始出現;而消毒時間為14 min 時，污染率降到7.5%，褐化死亡率卻達到10%，明顯影響外植體的存活，出現畸形苗;綜合污染率及褐化死亡率，草莓‘托特母’匍匐莖莖尖最合適消毒時間為12 min，存活率達87.5%。

　　2.2 不同培養基對初代培養不定芽誘導分化的影響

　　將消毒滅菌后的草莓‘托特母’匍匐莖莖尖正插于3 種誘導培養基中，各接20 個莖尖，暗培養7 d，然后轉為光照培養。結果見表2，經過3～4 周的光照培養后，發現所有的培養基上都能分化出芽，其中MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L培養基中先出現小芽，13 d 即出芽，發芽率最高，為75%，芽質量較好。其他2 個培養基MS +6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L和MS+KT 0.5 mg/L+2-4D0.1 mg/L差別不大，且內莖質量差，不利于繼代增殖。經過幾次的莖尖芽誘導培養的反復比較試驗，認為MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L是草莓‘托特母’莖尖較好的誘導培養基配方。

　　表1 升汞不同消毒時間對外植體的影響

　　

 

　　表2 不同培養基對不定芽誘導分化的影響

　　

 

　　表3 不同激素組合對增殖培養的影響

　　

 

　　2.3 不同激素組合對草莓‘托特母’增殖培養的影響

　　細胞分裂素和生長素在植物組織培養的增殖過程中起著關鍵作用，本試驗為了尋找較好的細胞分裂素6-BA、KT和生長素IBA配比，同時比較6-BA、KT兩種細胞分裂素對草莓‘托特母’匍匐莖莖尖增殖的影響，特將經初代培養獲得的無菌苗接種在含有不同激素組合的增殖培養基上，30 d 后觀察統計試驗結果。由表3 可以看出，6-BA的增殖倍數總體比KT高;當6-BA的濃度為0.5 mg/L時，增值系數較低;當6-BA的濃度增高到1.0 和1.5 mg/L時，增值倍數達到6.2 和5.5，得到明顯的提高，但高到2.0 mg/L時，增殖系數又降到5.0，而且苗出現黃化萎蔫。而以KT為細胞分裂素的試驗中發現，使用KT容易出現愈傷組織，但難以分化形成叢生芽，所以增殖系數低于6-BA。因此，當6-BA濃度為1.0 mg/L和IBA濃度為0.5 mg/L時，草莓‘托特母’的增殖系數最高。

　　2.4 生根培養及煉苗移栽

　　當繼代增殖培養基中的芽長至約3 cm時，將小苗移到生根培養基中，促其生根壯苗。草莓‘托特母’生根較為容易，有些在增殖培養中就會發根。培養10 d 左右均可以長出3～4 條根。試驗中發現生根培養基中加入適當的活性炭有利于生根，可以縮短生根時間，增加根數和根長。由于瓶內生根的試管苗直接移栽到大田不易成活，盲目移栽或稍有不慎都會造成組培苗的死亡，所以煉苗馴化也是植物擴繁技術中較為重要的一環。當根長至2 cm左右時，把培養瓶移到室溫下有散射光的地方，3 d 后微開瓶，再過2 d 后全開瓶，期間要噴水保持一定的濕度，4 d 之后進行煉苗移栽。移栽前，苗床基質草炭土、珍珠巖以1∶1 的比例混合，用消毒劑將苗床進行消毒。移栽時把根部培養基清洗干凈，移栽后要注意保持空氣濕度，遮蔭防曬，移栽1 周后噴施1/2MS 母液2 次，每隔1 周噴1 次，待恢復生長后，配合噴施葉面肥，成活率可達95%以上。為保證母株有充足的營養面積和匍匐莖伸展的空間，每公頃定植4.5 萬株左右。

　　3 討論

　　滇西北地區有著種植發展冷涼有機草莓得天獨厚的氣候優勢，而草莓‘托特母’生殖生長期需要低溫冷涼的氣候條件。該品種抗逆性強，豐產性好，符合優良加工型有機草莓品種的性狀特征，非常適應在滇西北地區種植。利用組織培養技術，快速繁殖大量優質草莓種苗，是防止品種的退化與感病、提高草莓的產量與品質的有效途徑。

　　在本試驗中，莖尖消毒滅菌的時間非常重要，處理時間短，滅菌不徹底，造成外植體的污染;處理時間過長，外植體褐化死亡，影響其芽的誘導，本試驗結果表明，0.1%升汞最適宜的消毒時間為12 min。

　　不定芽的誘導培養過程中使用MS +6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L的培養基，出芽率達到75%，比較理想。另外與直接進行光培養相比，先暗培養7 d 再轉到正常光照培養可以提高芽的誘導率。發現預先對‘紅豐’草莓葉盤進行暗處理能顯著提高葉盤不定芽的再生，這可能與生長素光氧化降解作用有關。在增殖階段，細胞分裂素和生長素的配比要適量，MS +6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L為較佳的增殖培養基，增殖倍數達6.2倍。如果培養基中激素水平較高，就會出現畸形苗。草莓‘托特母’的生根較為容易，繼代增殖培養中就有苗生根。生根培養基中加入適當的活性炭有利于生根，可顯著縮短生根時間，增加根數和根長。適宜濃度的活性炭在植物組織生根培養階段可提供生根暗環境，提高培養體內蛋白和糖的含量。

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