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      活性炭在植物組織培養中的應用

      作者: 組培設備 發布時間: 瀏覽次數0

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        活性炭是一種具有極豐富空隙構造的多孔徑炭化物,有良好的吸附性?;钚蕴恳驯粡V泛應用于植物組織培養中,可吸附培養基中的有害物質,包括瓊脂中所含的雜質、外植體在培養過程中分泌的酚醌類等對外植體自身有害的物質以及蔗糖在高壓滅菌時產生的5-羥甲基糠醛,同時也能吸附生長調節物質、維生素B6、葉酸和煙酸等有益物質。在植物組織培養中活性炭主要應用于以下幾個方面。

      植物組織培養

        1、防褐變,提高初代培養成活率

        在初代培養中,加入適量活性炭,可以吸附外植體產生的致死性褐化物,促進外植體成活。研究表明,蝴蝶蘭、芍藥、杜鵑、香蕉、蘋果屬植物等初代培養時,加入適量活性炭可明顯改善外植體褐變情況。在許多植物的胚培養時,也使用了活性炭。甜柿含酚類物質較多,組培時褐變嚴重,從而增加了胚培養的難度,需添加抗氧化劑。艾鵬飛等研究發現,活性炭抗褐化效果比檸檬酸、聚乙烯吡咯烷酮效果好。Cain等在培養葡萄胚珠時也發現,培養基中加入0.1%活性炭可減輕組織變褐和培養基變色,并產生較少愈傷組織,而不加活性炭則組織會變褐,并因產生愈傷組織過多而死亡。

        2、促進芽增殖和苗生長

        在新梢增殖階段,在適宜的濃度范圍內,活性炭可明顯促進芽的增殖及新梢的形成和伸長。在庫拉索蘆薈芽增殖培養中發現,將消毒嫩莖接種于附加不同糖、生長調節劑和活性炭的培養基,當活性炭濃度為0.3%時,平均增殖芽30個;當活性炭濃度為0.5%時,平均增殖芽41個。韓文璞等在甜櫻桃組織培養中發現,在培養基中加入250 mg/L的活性碳,生長表現好,可使試管苗增殖5.1倍,苗高4.5 cm,且生長健壯,葉色濃綠;活性炭為500 mg/L時,增殖4.3倍,苗高3.6 cm;當活性炭濃度增至750~1 000 mg/L時,增殖效果明顯下降并受到控制。在唐菖蒲培養中發現,成苗培養基中添加0.2%~1.0%的活性炭,對提高成苗率和提高大苗的百分比有顯著的效果,且在此范圍內活性炭的用量與其促進效果呈正相關?;钚蕴繉ζ咸言嚬苊绲纳L有促進作用,不僅表現在株高和葉片數上,而且其植株生長健壯、葉色深綠?;钚蕴窟€可促進中國水仙、百合、大花蕙蘭小球莖、馬鈴薯微型薯的形成,加快繁殖速度。

      植物組織培養

        3、創造黑暗環境,促進生根

        活性炭廣泛的應用是用于培養物的生根。一般認為活性炭創造的黑暗環境有利于根的誘導和根系的生長,其機理一般認為與活性炭減弱光照有關,可能是由于根頂端產生促進根生長的IAA,但IAA易受可見光的光氧化而被破壞,因此活性炭的主要作用就是通過減弱光照保護IAA,從而間接促進了根的生長,由于根的生長加快,吸收能力增強,反過來又促進了莖、葉的生長。

        在甜櫻桃組織培養中,添加500~1 000 mg/L活性炭的生根率為95.7%~100%,添加2 000~4 000 mg/L活性炭時,生根率大幅度下降,莖的木質化程度也隨濃度的增加而增加;不加活性炭的試管苗根系愈傷化加重,根的組織疏松并褐化,需降低生長素濃度。加入活性炭培養的生根苗移栽成活率均高于對照,且隨濃度的增加(1 000~4 000 mg/L)成活率由92.6%提高到100%,移栽后6 d即產生次生根,莖葉開始生長,而對照的生根苗成活率僅46.3%。劉用生等在蘋果試管苗生根培養中發現,在培養基中NAA僅含0.5 mg/L時,新稍基部產生愈傷組織,沒有生根;在0.05%活性炭存在條件下,NAA含0.5 mg/L和3 mg/L均未能表現作用,與僅含0.05%活性炭處理相似,附加NAA 5.5 mg/L能表現一定作用,NAA 8 mg/L時效果較佳。這表明活性炭吸附生長素,但生長素濃度大時,被吸附后還有一定剩余,與活性炭同時發揮作用。甜柿試管苗生根困難,添加活性炭有利于其生根,且根系健壯,移栽易成活,這可能與活性炭能提供暗環境和能吸收培養基中代謝有害物質的雙重效應有關。另外在葡萄試管苗生根培養中,添加活性炭后根系生長加快,而且質地柔韌不易折斷,對照的根雖稍多些,但粗短質脆??梢娚囵B時,只有培養基中活性炭和生長素的量適當,才能促進生根,活性炭過多時,大量吸附培養基中的生長素不僅不能促進生根,反而抑制生根。

        4、用于花藥培養

        花藥培養的主要目的是誘導花粉發育成單倍體,可快速獲得純系,縮短育種周期,但實踐表明,小孢子的啟動發育對藥壁組織有相當大的依賴關系。目前對小孢子啟動和進一步發育的機理和條件了解不多,花粉培養難度較大?;ㄋ幣囵B時,培養基中加入活性炭對提高誘導頻率也有一定效果?;钚蕴坑糜诨ㄋ幣囵B是Nakamura等首先提出的,目前,已在油菜、馬鈴薯、煙草、玉米、黑麥、小黑麥、龍眼、辣椒、甜椒和水稻的花藥培養中得到應用。朱海山發現在玉米花藥培養中所有加活性炭處理的胚狀體分化和綠色小植株產生的百分率均高于未加活性炭的對照。另外,在培養基中加入適量的活性炭,可降低玻璃苗的產生頻率,對防止產生玻璃苗有良好作用。

      植物組織培養

        5、注意事項

        在活性炭應用中都發現,活性炭添加過量時會大量吸附培養基中的生長調節物質,導致生長調節物質不能正常發揮作用。卜學賢等研究發現,每1 mg直徑小于0.13 mm的分析純粉狀活性炭大約能吸附100 ug左右的生長調節物質。在菊花、矮牽牛等組培試驗中發現,同時加有0.5%活性炭和生長調節劑的培養基與只加有活性炭的培養基相似,完全不表現生長調節物質的作用。同時,活性炭的加入會削弱瓊脂的凝固能力。因此,使用活性炭要有量的意識,只有適量使用才能充分發揮其積極作用。

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