在植物組織培養過程中，雖然是人工控制營養條件和環境條件，可以克服種子繁殖中存在的諸多問題，但在離體培養過程中，外植體自身和培養條件對組織培養體系建立的成功與否仍有著很大的影響。

　　1、外植體

　　1.1 外植體選擇 外植體的植物基因型、種類、來源、大小、取材季節及外植體的生理狀態和發育年齡等因素，在很大程度上決定了組織培養的難易程度，甚至成敗。選取旱半夏的葉、葉柄、珠芽3種外植體進行比較，研究不同外植體的愈傷組織誘導效果，結果表明，相比較而言，以葉片作為外植體更利于愈傷組織的誘導，不僅誘導率高，且再生苗生長情況也較好。分別以葉片、葉柄、莖、花瓣和花柄為外植體，探究了不同外植體對黃精葉鉤吻愈傷組織誘導的影響，結果表明：在5種外植體中，誘導愈傷組織的最佳外植體為莖段。以莖段為外植體時出愈率高、愈傷量大，且配合誘導愈傷組織最佳的培養基時效果更佳。選取1月剛長出的嫩莖、嫩葉以及黃精根莖為研究材料，探討了黃精不同外植體對愈傷組織誘導的影響，結果顯示，以根莖和嫩莖為外植體時的褐化率較高，無法愈傷成功，相比之下，黃精最佳外植體選擇應為黃精嫩葉，其較容易誘導出愈傷組織，且褐化現象較輕，成活率很高。

　　1.2 外植體消毒 在植物組織培養過程中，外植體體內自生的微生物如病毒、類病毒、細菌等，會帶來內源性污染，一般外在的消毒方式不能將其清除，可采取添加青霉素、鏈霉素、利福平等抗生素和殺菌劑結合使用，以達到滅菌的效果。篩選出藥用植物猴耳環種胚的最佳滅菌方式為：0.1%HgCl2處理12min，污染率16.10%，無菌萌發率78.66%。在半寄生藥用植物百蕊草的組織培養研究中指出，愈傷組織誘導培養過程中，以莖為外植體時，誘導效果優于葉，但污染率高于葉，分析原因可能是莖內自身的次生菌所致。在桔梗微體快繁與脫毒技術的研究中指出：分化好的無菌桔梗小苗采用高溫與莖尖相結合的辦法，有利于去掉桔梗小苗本身所帶的病毒，并采用電子顯微鏡觀察法鑒定采用以上方法可除去桔梗的病毒。對南方紅豆杉外植體的消毒方式篩選后，提出了誘導時控制染菌率的最適宜消毒方法：75%酒精0.5min+0.1%氯化汞8min，培養基中添加0.35%的丙酸鈉殺菌劑。

　　2、培養條件

　　2.1 培養基 培養基是植物組織培養中最主要的部分，為植物組織提供所需的無機和有機營養成分，供植物生長發育。Francesca E. 通過添加不同濃度的細胞生長素和細胞分裂素的MS培養基，研究其對誘導絲葉蒼角殿(Schizobasis intricata)外植體球莖形成的影響，結果表明，培養基中添加2mg/L芐基腺嘌呤和2mg/L萘乙酸的激素組合誘導的莖尖反應最好，平均每個外植體產生14.1個芽。此外，還發育出愈傷組織。通過反復在同一培養基上進行繼代培養的方法，使鱗莖的形成不再需要一段暗培養的時期。在鱗莖直徑大于3mm時，進行了生根試驗，最佳培養方案為培養基1/2MS+NAA1mg/L，平均每個鱗莖在35d內生根8根，且根部的硬化是非常成功的。選用固體培養法培養，通過MS、B5、N6這3種不同基本培養基以及KT、2，4-D、6-BA3種外源生長調節物質的對比試驗，篩選出虎杖愈傷組織的適宜培養基為基本培養基MS，激素種類為適當濃度的NAA或KT，且發現添加KT的培養基上誘導的愈傷組織較緊密，有利于分化。培養基MS+NAA2mg/L+KT 0.1mg/L上誘導愈傷組織較好，根莖芽的誘導率最高達73%。在四川大葉黃精組培快繁技術研究中對比了不同培養基對根莖芽萌發、不定芽分化、生根和不同激素組合對壯苗的影響，結果表明，以大葉黃精的地下根莖芽為外植體時，最適宜的初代培養基為MS+6-BA0.5mg/L+NAA 0.5mg/L，萌發率達35%。不定芽分化培養基為MS+6-BA0mg/L+NAA0.2mg/L，平均不定芽誘導個數為4.33個。壯苗培養基為MS+6-BA1.5mg/L+2，4-D0.5mg/L+GA3 0.5mg/L。生根培養基為1/2MS+NAA 1.0mg/L+IBA0.2mg/L+AC0.2g/L，生根率達89%。其中，細胞分裂素6-BA在大葉黃精生長過程中起著重要作用。通過在培養基中適當使用植物生長調節劑的方法對石斛組織培養模式進行了研究，結果表明，含有1mg/L meta-topolin和0.8mg/L Putrescine的MS培養基，石斛外植體的芽增殖率最高;添加吲哚丁酸2mg/L和0.5mg/L phloroglucinol的半強度MS培養基，生根率較高，最高達10.1根/枝。利用SCoT和IRAP等分子標記對再生植株進行遺傳穩定性評價，發現再生植株具有較高的遺傳穩定性。并采用DPPH、FRAP和金屬螯合試驗對母本和微繁植物的抗氧化能力進行了評價，結果顯示，微繁殖植株抗氧化活性顯著提高，繁殖快，具有更高的遺傳穩定性和抗氧化能力。

　　2.2 光照條件 光照條件對植物細胞、組織、器官的生長和分化及次生代謝物質積累水平有著不容忽視的影響。光對于植物組織培養的影響主要表現在光質、光照強度以及光照時間等方面。一般來說，黑暗條件對于細胞、愈傷組織的增殖更有利，一定的光照條件對器官的分化更有利。研究表明，在L30光強條件下，從生長角度來說，最適合臺灣金線蓮的生長發育。對比了不同光照條件下三七愈傷組織的生長和皂苷積累情況，與對照材料比較后發現，愈傷組織在光下培養后發生分化，表面變綠，甚至長出幼芽，光照可以促進愈傷組織的分化，抑制皂苷積累。篩選了人參不定芽誘導的光照條件，結果表明，交替光照條件下不定芽的分化系數高于全黑暗和全光照培養，全光照條件利于不定芽增殖。

　　2.3 其他條件 在藥用植物組織培養中，溫度、通氣、濕度等培養條對藥用植物誘導、生長和分化同樣具有很大的影響。在牛蒡的組織培養研究中采取培養條件：溫度(25±1)℃，光強1000lx，光照時間14h/d誘導無菌苗，待生根，小植株長到5～6cm時，將培養間光照強度改為1500～2000lx，煉苗2d后移栽，保持濕度情況下，移栽成活率達80%。研究表明，pH和培養轉速與矮紫杉細胞懸浮培養褐化呈負相關關系，磷源對細胞褐化的影響遠大于氮源，一定程度的光照促進了細胞的生長增殖，光照強度過大則會出現褐化現象;因此，2mB5培養基、24h光照、強度1500lx、pH7.0、22℃、90r/min為最優培養條件。篩選出藥用植物青天葵懸浮培養的合適pH值為6.0，蔗糖濃度為1%;同時，也發現暗培養條件能加快愈傷組織的生長速度。

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